公布日：2023.10.27
申請日：2023.07.19
分類號：C12N1/20(2006.01)I;C02F3/34(2023.01)I;C02F3/02(2023.01)I;C12R1/38(2006.01)N;C12R1/01(2006.01)N;C12R1/22(2006.01)N;C02F101/36(2006.01)N;
C02F101/34(2006.01)N;C02F101/30(2006.01)N
摘要
本發明提供一種用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑及其制備方法和應用，復合微生物菌劑由復合微生物菌劑由嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)組成。通過采用本發明的技術方案，各組分種群相互協同，強化對生產廢水的降解效能，且對于對氯間二甲苯酚的含量也能夠通過生物作用的方法進行去除，降解方法針對性強、響應時間快、操作簡單，可以應用于含有對氯間二甲苯酚的生產廢水中，同時還能夠有效降低廢水的COD。
權利要求書
1.一種用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑，復合微生物菌劑由復合微生物菌劑由嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)組成。
2.根據權利要求1所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑，其特征在于，所述復合微生物菌劑中，各菌株的菌細胞濃度百分比為嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％。
3.根據權利要求1或2所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑，其特征在于，所述復合微生物菌劑為液體菌劑；所述液體菌劑中菌細胞濃度為≥109個/mL。
4.根據權利要求3所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑，其特征在于，所述復合微生物菌劑對含對氯間二甲苯酚生產廢水的COD降解率≥85％，對對氯間二甲苯酚的分解率可達70％。
5.一種如權利要求1-4任一項所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)活化；S2、將活化后的8種菌株分別接種到培養基中，直至每種培養基中菌細胞濃度≥109個/mL；S3、按嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％的菌細胞濃度百分比將8種菌液混合，得到所述復合微生物菌劑。
6.根據權利要求5所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述培養基包括營養瓊脂平板培養基和LB液體培養基；將活化后的菌株分別接種至所述營養瓊脂平板培養基中長出比較均一、規則的菌落后，再接種至所述LB培養基中，直至每種培養基中菌細胞濃度≥109個/mL。
7.根據權利要求6所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述營養瓊脂平板培養基中培養條件包括25℃-30℃溫度下培養24h-48h；所述LB液體培養基中培養條件包括好氧培養、30℃溫度條件下培養24h-48h。
8.一種如權利要求1-4任一項所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)活化；S2、將10種活化后的菌株分別接種到培養基中，直至每種培養基中菌細胞濃度≥109個/mL；S3、將S2培養后的菌種分別按10％的接種量接種入500L種子罐，好氧培養至對數生長期，所述種子罐中的培養基為LB液體培養基；S3、將種子液按10％接種量接入生產罐中培養，所述生產罐中的培養基與所述種子罐中的培養基相同；S4、在所述生產罐結束后菌體數量≥10億個/mL，完成后分別出罐，依照菌細胞百分比濃度比例將10種菌混合，即為所述復合微生物菌劑的液體菌劑。
9.根據權利要求8所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑的制備方法，其特征在于，所述生產罐中的培養條件包括攪拌速度為180～240r/min，培養溫度為30℃，整個工藝流程培養時間為48～60h。
10.如權利要求1-4任一項所述的用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑或如權利要求5-8任一項所述的制備方法得到的所述復合微生物菌劑在處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的應用，接種量為1～5g/L。
發明內容
有鑒于此，本發明提供一種用于處理含對氯間二甲苯酚(PCMX)生產廢水的復合微生物菌劑及其制備方法和應用，通過各組分種群的相互協同作用，強化對降解底物的降解效能、響應時間快、操作簡單。
為了達到上述目的，本申請提供如下技術方案：
一種用于處理含對氯間二甲苯酚生產廢水的復合微生物菌劑，復合微生物菌劑由復合微生物菌劑由嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)，耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)，硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)，賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)，球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)，克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)，檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)，弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)組成。
優選地，所述復合微生物菌劑中，各菌株的菌細胞濃度百分比為嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％。
優選地，所述復合微生物菌劑為液體菌劑。
優選地，所述液體菌劑中菌細胞濃度為≥109個/mL。
本發明還提供了上述復合微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：
S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)活化；
S2、將活化后的8種菌株分別接種到培養基中，直至每種培養基中菌細胞濃度≥109個/mL；
S3、按嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％和弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％的菌細胞濃度百分比將8種菌液混合，得到所述復合微生物菌劑。
優選地，所述培養基包括營養瓊脂平板培養基和LB液體培養基；將活化后的菌株分別接種至所述營養瓊脂平板培養基中長出比較均一、規則的菌落后，再接種至所述LB培養基中，直至每種培養基中菌細胞濃度≥109個/mL。
優選地，所述營養瓊脂平板培養基中培養條件包括25℃-30℃溫度下培養24h-48h；所述LB液體培養基中培養條件包括好氧培養、30℃溫度條件下培養24h-48h。
進一步地，上述制備方法的具體步驟還包括：
S1、將嗜堿假單胞菌(Pseudomonasalcaliphila)25％-35％、耳炎假單胞菌(Pseudomonasotitidis)20％-35％、硝基還原假單胞菌(Pseudomonasnitroreducens)20％-35％、賴氨酸芽孢桿菌(Lysinibacillusmangiferihumi)5％-15％、球形賴氨酸桿菌(Lysinibacillussphaericus)5％-10％、克雷伯氏菌屬(Klebsiellasp.)5％-10％、檸檬酸桿菌(Citrobacterwerkmanii)5％-10％、弗氏檸檬酸桿菌(Citrobacterfreundii)5％-10％活化；
S2、將10種活化后的菌株分別接種到培養基中，直至每種培養基中菌細胞濃度≥109個/mL；
S3、將S2培養后的菌種分別按10％的接種量接種入500L種子罐，好氧培養至對數生長期，所述種子罐中的培養基為LB液體培養基；
S3、將種子液按10％接種量接入生產罐中培養，所述生產罐中的培養基與所述種子罐中的培養基相同；
S4、在所述生產罐培養結束后菌體數量≥10億個/mL，完成后分別出罐，依照菌細胞百分比濃度比例將10種菌混合，即為所述復合微生物菌劑的液體菌劑。
優選地，所述生產罐中的培養條件包括攪拌速度為180～240r/min，培養溫度為30℃，整個工藝流程培養時間為48～60h。
將上述復合菌劑應用于含對氯間二甲苯酚生產廢水的處理中，能夠將排除的廢水中的對氯間二甲苯酚的含量降低至30％以下，且對所述復合微生物菌劑對含對氯間二甲苯酚生產廢水的COD降解率≥85％。
尤其地，對于含有對氯間二甲苯酚的生產廢水應當都具有上述效果。
本發明所獲得的有益技術效果：
1.通過采用本發明的技術方案，各組分種群相互協同，強化對降解底物的降解效能，并通過微生物降解的方法，處理對氯間二甲苯酚有機的含量，針對性強，降解方法針對性強、響應時間快、操作簡單，可以應用于COD的降解，也可以應用于含對氯間二甲苯酚廢水好氧處理。
2.通過采用本發明的技術方案，將復合微生物菌劑應用于實現的生產廢水好氧處理中，借助復合菌劑的優勢，能夠大大降低生產廢水中COD與對氯間二甲苯酚的含量等作用，處理效果穩定，能夠實現達標排放。
（發明人：張紅日;鐘隆鳴;劉秀艷）
