隨著環保意識的逐漸增強，人們越來越關注抗生素在環境中的積蓄 、轉移、轉化和對各種生物及人類健康的影響，成為一個新的研究熱點 。 泰樂菌素是十六環的大環內酯類抗生素，為畜禽專用抗生素藥 物 ，對革蘭氏陽性菌和支原體有較強的抑制能力〔1〕。當含有泰樂菌素的藥廠廢水 不加檢控處理，直接進入河流、湖泊等水環境時，將在水產動物肌體內積蓄，使細菌產生抗藥性 。如果這種抗藥性轉移給感染人的細菌，會導致針對人細菌的抗生素效力降低或失去抗菌作用〔2〕。因此對廢水中的抗生素含量進行檢測控制勢在必行。目前在抗生素類藥物的殘留檢測方面已有一定成就，仲曉寧等〔3〕建立了雙波長紫外分光光度法，同時測定酒石 酸泰樂菌素 -鹽酸多西環素可溶性粉中的酒石酸泰樂菌素和鹽酸多西環素含量 ; 楊方等〔4〕利用高效液相色譜法同時檢測水產品中的螺旋霉素和泰樂菌素藥物殘留; M. Dubois 等〔5〕和趙東豪等〔6〕分別建立了HPLC -MS/MS 檢測各種組織( 肌肉 、腎臟和肝臟)、蛋和牛奶中5 種大環內酯類藥物及豬肉中 6 種大環內酯類抗生素的方法 ; 劉志梅等〔7〕提出了中空纖維液相微萃取—高效液相色譜法測定牛奶中 3 種殘留抗生素。泰樂菌素生產工藝是我國制藥行 業近幾年才從國外引進的，目前對藥廠廢水中殘留的泰樂菌素如何檢控與檢測尚未見報道。筆者在兼顧我國質檢機構裝備水平的基礎上，應用 HPLC 結合固相萃取技術對廢水中泰樂菌素的檢測方法進行了研究 ，建立一種穩定 、簡便、快捷的檢測方法。

　　1 實驗部分

　　1.1 儀器與試劑

　　儀器： 1010 型高效液相色譜儀，上海通威分析技術有限公司 ; MGS-2200 氮吹儀 ，日本東京理化器械 株 式 會 社 ; 固 相 萃 取 柱 ，ODS-SPE spec (500 mg， 6 mL)，Angele 公司 ; Scholar NEX power1000 超純水處理器，北京普析通用儀 器有限責任公司 ; 色譜柱 ， Kromasil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)。

　　試劑 ： 乙腈 、乙醇 、甲醇 、皆為色譜純 ; 磷酸 、磷酸二氫鈉，為優級純 ; 泰樂菌素標準品 ，德國 Dr. Ehren- storfer 公司 ; 實驗用水為去離子水 。

　　1.2 實驗方法

　　標準儲備液的配制：準確稱取0.1g(精確到 0.0001g)泰樂菌素標準品，用甲醇溶解并定容于 100mL棕色容量瓶中，搖勻。此溶液質量濃度為 1g/L，置于冰箱中避光保存備用。

　　標準曲線的繪制：將上述標準儲備液逐級稀釋至質量濃度為10mg/L。分別移取稀釋后的標準溶液 0、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0mL于容量瓶中，用水定容至10mL，以約2mL/min的速度分別通過固相萃取柱。待溶液全部流出后以10mL水淋洗，棄去淋洗液，繼續減壓抽干5min，以10mL甲醇洗脫柱上的吸附物并收集于小試管中，在氮吹儀上將洗脫液吹干，用流動相定容1mL，待測。

　　固相萃取柱活化：將固相色譜柱置于固定架上，加入10mL甲醇，待甲醇流完后用10mL二次蒸餾水沖洗兩次。

　　廢水樣品的測定：將新采集的廢水水樣用孔徑 0.45μm微濾膜過濾后，視廢水中的泰樂菌素濃度取一定量的濾液通過固相萃取柱，采用與標準曲線繪制相同的方法進行處理。

　　液相色譜工作條件：流動相為V(乙腈)∶V(0.5% 磷酸)=90∶10;紫外檢測器測定波長為282nm;流動相流速為1mL/min;柱溫為30℃。

　　2 結果與討論

　　2.1 測定波長的選擇

　　準確移取1.5mL標準儲備液于容量瓶中，用水定容至50mL，用此泰樂菌素溶液進行光譜掃描，結果見圖1。

 圖 1 泰樂菌素光譜掃描

　　實驗發現波長為282nm處待測組分有最大吸光度，同時對所用溶劑甲醇進行掃描，其最大吸收波長為197nm，在282nm處基本無吸收，因此本實驗選擇282nm為測定波長。

　　2.2 流動相及其比例選擇

　　實驗選用了兩種流動相體系：(1)乙腈+0.5%磷酸;(2)乙腈+0.005mol/L磷酸二氫鈉。流動相中各組分的體積比為：V(乙腈)∶V(0.5%磷酸)〔或V(乙腈)∶V(0.005mol/L磷酸二氫鈉)〕=100∶0、95∶5、90∶10、 85∶15、80∶20、70∶30、60∶40、50∶50，流速為1mL/min，待測樣品中泰樂菌素質量濃度為2mg/L。實驗發現流動相體系(1)的響應信號大于體系(2)，且當乙腈與 0.5%磷酸的體積比為90∶10時峰形尖銳，響應信號峰形及分離度較好，因此實驗選用流動相為V(乙腈)∶V(0.5%磷酸)=90∶10。

　　2.3 洗脫劑的選擇

　　選用了4種洗脫劑：8.76mmol/L H3PO4-甲醇溶液、8.76mmol/L H3PO4-乙腈溶液、甲醇及乙腈進行實驗。將10mL泰樂菌素質量濃度為2mg/L的水樣通過固相色譜柱，分別用10mL上述4種洗脫劑進行洗脫。洗脫液用氮氣吹干后用乙腈溶解、定容至 1mL，用HPLC測定峰面積，結果見表1。

　　由表1可見，甲醇為洗脫劑時對待測組分的洗脫效果較好。

　　2.4 洗脫劑用量的選擇

　　取10mL泰樂菌素廢水樣品(泰樂菌素質量分數為2mg/L)各4份，按1.2所述方法進行處理，分別用2.00、5.00、10.00、15.00mL甲醇洗脫，在選定的液相色譜工作條件下進行測定，結果如表2所示。

　　由表2可以看出，當洗脫劑甲醇的用量為 10.00mL和15.00mL時，洗脫效果相差不大，考慮到減少有機溶劑的用量，實驗采用10mL甲醇洗脫待測物。

　　2.5 標準曲線繪制

　　按1.2所述方法配制標準溶液系列并在選定的色譜條件進行測定，標準曲線及泰樂菌素標準樣品的色譜見圖2和圖3。標準曲線的線性關系良好， R2=0.9993，y=56340x-1248.9，其線性范圍為0.2~ 5mg/L。按3倍信噪比計算出該方法的檢出限為 0.0887mg/L。

圖 2 泰樂菌素標準曲線

 
圖 3 泰樂菌素標樣色譜

　　2.6 準確度與精密度實驗

　　準確移取20mL水樣，分別加入不同量的泰樂菌素標樣，按1.2所述方法處理水樣并進行測定，重復進樣6次進行精密度實驗，結果見表3。結果表明，實驗采用的泰樂菌素測定方法準確度較好。

 　　2.7 污水樣品測定

　　采集寧夏某藥廠的廢水排放口水樣(pH=7.8，總氮為47.7mg/L)進行測定，每個樣品平行測定3次，結果見表4、圖4。具體參見http://www.jianfeilema.cn更多相關技術文檔。

 圖 4 水樣1的液相色譜

　　3 結論

　　提出了用ODS-SPE固相萃取柱分離濃縮、高效液相色譜測定污水中泰樂菌素的方法。該方法操作簡便，快速準確。用其測定藥廠廢水中的泰樂菌素含量時得到了較滿意的結果。